血红蛋白的凝胶过滤

一、实验目的

1.了解凝胶柱层析的原理及应用；

2.掌握凝胶柱层析的基本操作技术为进一步掌握离子交换柱层析、亲和层析及吸附层析等其它分离方法打下良好的基础二、实验原理凝胶层析：原理与应用凝胶层析又称凝凝胶过滤是一种按分子量大小分离物质的层析方法该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中然后用缓冲液洗脱大分子无法进入凝胶颗粒中的静止相中只能存在于凝胶颗粒之间的流动相中因而以较快的速度首先流出层析柱而小分子则能自由出入凝胶颗粒中并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡因此就要花费较长的时间流经柱床从而使不同大小的分子得以分离凝胶过滤柱层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致且呈珠状颗粒的物质这种物质可以完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外而对某些小分子化合物则不能排阻但可让其在筛孔中自由扩散、渗透任何一种被分离的化合物被凝胶筛孔排阻的程度可用分配系数Kav（被分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示Kav值的大小与凝胶床的总体积（Vt）、外水体积（Vo）及分离物本身的洗脱体积（Ve）有关即：Kav= (Ve-Vo)/(Vt-Vo