医生回答
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大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌．该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致产的可能．食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示．3引用标准GB4789．28食品卫生微生物学检验染色法，培养基和试剂4设备和材料4．1温箱：36±1℃．4．2冰箱：0～4℃．4．3恒温水浴：44．5±0．5℃．4．4天平．4．5显微镜．4．6均质器或乳钵．4．7平皿：直径为90mm．4．8试管．4．9吸管．4．10广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL．4．11玻璃珠：直径约5mm．4．12载玻片．4．13酒精灯．4．14试管架．5培养基和试剂5．1乳糖胆盐发酵管：按GB4789．28中4．9规定．5．2伊红美蓝琼脂平板：按GB4789．28中4．25沥规定．5．3乳糖发酵管：按GB4789．28中4．10规定．5．4EC肉汤：按GB4789．28中4．11规定．5．5磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789．28中3．22规定．5．6生理盐水．5．7革兰氏染色液：按GB4789．28中2．2规定．6检验程序大肠菌群检验程序如下：（图略）7操作步骤7．1检样稀释7．1．1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液．固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液．7．1．2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液．7．1．3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管．7．1．4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管．7．2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管．每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行．7．3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验．7．4证实试验在上述平板上，挑壬疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况．凡乳糖管产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性．7．5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值．8粪大肠菌群(faecalcoliform)8．1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7．2条)转种于EC肉汤管内，置44．5±0．2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；
如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性．8．2结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值．
