暗视野显微镜检查,取硬下疳、丘疹或湿疣上的分泌物进行病原学检查。因检查受操作者的经验,取样的位置及数量等客观因素有关,结果为阳性可以确诊,若阴性不能排除感染梅毒的可能。
梅毒血清学检测,包括非梅毒螺旋体血清学试验,常用于临床筛选及判定治疗的效果,感染早期梅毒血清可呈阳性。